Mario oli nõbu Mano, ta näeb rohkem välja nagu Luigi, sest ta kannab rohelist korki. See vend ilmub erijuhtudel seenekuningriigi avatud ruumides, kuna tema elukutse on arst-virusoloog. Kuningriik hõlmas epideemiat. Teda rünnati korraga mitut tüüpi viirusi, dr Mano ilmus kohe oma instrumentidega. Arsti süstlat süüdistatakse võimsa viirusevastase vaktsiiniga. Lisaks on see universaalne ja toimib võrdselt erinevat tüüpi viiruste korral. Aidake kangelasel tegeleda mitmevärviliste viiruslike koletistega ja suudab superdokumendi Bros Mano tõkked läbi hüpata.
